GB 5413.14-2010发布稿 婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定 发布稿.rarGB 5413.14-2010发布稿 婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定 发布稿.rar

珍藏

压缩包内文档预览:
中华人平易近共跟国国家规范中华人平易近共跟国国家规范 GB 5413.142010 中 华 人 平易近 共 跟 国 卫 生 部中 华 人 平易近 共 跟 国 卫 生 部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实行 食物僻静国家规范 婴幼儿食物跟乳品中维生素 B12的测定 National food safety standard Determination of vitamin B12 in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.142010 I 前 言 本规范交流GB/T 5413.14-1997婴幼儿食物跟乳粉 维生素B12的测定。 本规范与GB/T 5413.14-1997比拟,重要变革如下 规范名称改为婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定。 本标准附录A为模范性附录。 本规范所交流规范的历次版本发布状况为 GB 5413-1985、GB/T 5413.14-1997。 GB 5413.142010 1 食物僻静国家规范 婴幼儿食物跟乳品中维生素 B12的测定 1 规模 本规范规则了婴幼儿食物跟乳品中维生素 B12的测定方法。 本规范适用于婴幼儿食物跟乳品中维生素 B12的测定。 2 模范性援用文件 本规范中援用的文件关于本规范的应用是必不可少的。 素日注日期的援用文件, 仅所注日期的版本 适用于本规范。素日不注日期的援用文件,其最新版本(包含全部的修正单)适用于本规范。 3 道理 应用莱士曼氏乳酸杆菌(Lactobacillus leichmannii)对维生素 B12的特异性跟敏锐性,定量测定出 试样中维生素 B12的含量。在测定用造就基中供应除维生素 B12以外的全部营养要素,何等微生物开展 孕育产生的透光率就会同规范曲线变乱液及未知待测溶液中维生素 B12的含量相对应。 以差异浓度规范溶液 的透光率相关于各浓度水平规范物资的浓度绘制规范曲线, 依据规范曲线即可算计出试样中维生素 B12 的含量。 4 试剂跟原料 除非尚有规则,本方法所用试剂均为剖析纯,水为 GB/T 6682 规则的二级水。 4.1 菌株莱士曼氏乳酸杆菌(Lactobacillus leichmannii)ATCC 7830。 4.2 维生素 B12 (Vitamin B12或 Cyanocobalamin)规范品分子式 C63H88CoN14O14P,纯度≥99。 4.3 造就基 4.3.1 乳酸杆菌琼脂造就基见附录 A。 4.3.2 乳酸杆菌肉汤造就基见附录 A。 4.3.3 维生素 B12测定用造就基见附录 A。 注一些商品化分化造就基结果优秀,商品化分化造就基按标签说明举行配制。 4.4 9 g/L 氯化钠溶液(心理盐水) 称取 9.0 g 氯化钠消融于 1000 mL 水中,分装于具塞试管,每管 10 mL。121 ℃灭菌 15 min。 4.5 乙醇溶液体积分数为 25 。 4.6 无水磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 4.7 无水着重亚硫酸钠(Na2S2O5)。 4.8 柠檬酸(含一个结晶水)(C6H8O7H2O)。 4.9 规范溶液的制备 4.9.1 维生素 B12蕴藏液(10 μg /mL)准确称取维生素 B12规范品(4.2),用乙醇溶液(4.5)定容 至维生素 B12浓度为 10 μg /mL。 GB 5413.142010 2 4.9.2 维生素 B12中央液(100 ng/mL)用乙醇溶液(4.5)将 5.0 mL 维生素 B12蕴藏液(4.9.1)定 容至 500 mL。 4.9.3 维生素 B12变乱液(1 ng/mL)用乙醇溶液(4.5)将 5.0 mL 维生素 B12中央液(4.9.2)定容 至 500 mL。 4.9.4 规范曲线变乱液 区分吸取两个 5 mL 维生素 B12变乱液 (4.9.3) 于 250mL 跟 500mL 容量瓶中, 用水定容至刻度。高浓度溶液的浓度为 0.02 ng/mL;低浓度溶液的浓度为 0.01 ng/mL。 注全部规范溶液要贮存于冰箱内。4.9.1、4.9.2 跟 4.9.3 生涯期三个月,4.9.4 临用前配制。 5 仪器跟设备 除微生物实行室常规灭菌及造就设备外,其他设备跟原料如下 5.1 天平感量为 0.1 mg。 5.2 pH 计精度≤0.01。 5.3 分光光度计。 5.4 涡旋混杂器。 5.5 离心计心情转速≥2000 转/分钟。 5.6 恒温造就箱36 ℃ ± 1 ℃。 5.7 冰箱2 ℃~5 ℃。 5.8 无菌吸管10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器跟吸头。 5.9 瓶口分液器0 mL~10 mL。 5.10 锥形瓶200 mL。 5.11 容量瓶(A 类)100 mL,250 mL,500 mL。 5.12 单刻度移液管(A 类)容量 5 mL。 5.13 漏斗直径 90 mm。 5.14 定量滤纸直径 90 mm。 5.15 试管18 mm 180 mm。 注 准备玻璃仪器时, 应用活性剂对硬玻璃测定管及其他需求的玻璃器皿举行洗迓洫, 洗迓洫之后央求在 200 ℃干热 2 h。 6 剖析措施 6.1 测试菌液的制备 6.1.1 将莱士曼氏乳酸杆菌 (ATCC 7830) 的冻干菌株 (4.1) 活化后, 接种到乳酸杆菌琼脂造就基 (4.3.1) 上,36 ℃ ±1 ℃造就 24 h。再转种 2 代~3 代来增强生气盼望。置 2 ℃~5 ℃冰箱生涯备用。每 15 d 转种一 次。 6.1.2 将活化后的菌株接种到乳酸杆菌肉汤造就基(4.3.2)中,36 ℃ ± 1 ℃造就 18 h~24 h,以 2000 转/分钟离心 2 min~3 min,弃去上清液,介入 10 mL 心理盐水(4.4),混匀,再离心 2 min~3 min, 弃去上清液,再介入 10 mL 心理盐水(4.4),混匀。如前离心支配,弃去上清液。再加 10 mL 心理盐 水(4.4),混匀。吸适量该菌悬液于 10 mL 心理盐水(4.4)中,混匀制成测试菌液。 6.1.3 用分光光度计(5.3),以心理盐水(4.4)做空白,于 550 nm 波长下测测试菌液(6.1.2)的透 光率,使其透光率在 60 ~80 之间。 6.2 试样的处置处分 GB 5413.142010 3 6.2.1 称取无水磷酸氢二钠 (4.6) 1.3 g, 无水着重亚硫酸钠 (4.7) 1.0 g, 柠檬酸 (含一个结晶水) (4.8) 1.2 g,用 100 mL 水消融。 6.2.2 称必定量的样品 准确到 0.0001 g, 含维生素 B12约 50 ng 100 ng, 用 10 mL 的上述溶液 (6.2.1) 混杂后,再加 150 mL 水,于 121 ℃水解 10 min,冷却后调 pH 至 4.5 ± 0.2,再用水定容至 250 mL,过 滤。移取滤液 5 mL,介入水 20 mL~30 mL,调 pH 至 6.8 ± 0.2,用水定容至 100 mL。最终溶液中维生 素 B12 的质量浓度约在 0.01 ng/mL~0.02 ng/mL,着重亚硫酸钠的质量浓度小于 0.03 mg/mL。 6.3 规范曲线的制作 按表 1 次序递次介入水、规范曲线变乱液(4.9.4)跟维生素 B12 测定用造就基(4.3.3)于造就管中, 一式三份。 表1 规范曲线的制作 试管号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 水(mL) 5 5 4 3 2 1 0 2 1 0 0.01 ng/mL规范曲 线变乱液(mL) 0 0 1 2 3 4 5 0 0 0 0.02 ng/mL规范曲 线变乱液(mL) 0 0 0 0 0 0 0 3 4 5 造就基(mL) 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 6.4 待测液的制作 按表 2 次序递次加水、样品溶液(6.2.2)跟维生素 B12测定用造就基(4.3.3)于造就管内,一式三份。 表2 待测液的制作 试管号 1 2 3 4 水(mL) 4 3 2 1 待测液(mL) 1 2 3 4 造就基(mL) 5 5 5 5 6.5 灭菌 将 6.3 跟 6.4 中全部的试管盖上试管帽,121 ℃灭菌 5 min(商品造就基按标签说明举行灭菌) 。 6.6 接种 将上述试管矫捷冷却至 30 ℃以下。用滴管或移液器向上述试管中各滴加 1 滴(约 50 ?L)测试菌 液(6.1.2) (其中规范曲线管中空白 S1 除外) 。 6.7 造就 将试管放入恒温造就箱内,36 ℃ ± 1 ℃造就 19 h~20 h。 6.8 测定 造就终了后,对每支试管举行奶镡搜索,未接种试管 S1 内造就液应是廓清的,假如出现混浊,则 测定有用。 6.8.1 以接种空白管做比照,测定最高浓度规范曲线试管的透光率,2 h 后从新测定。两次结果透光率 差值若小于 2 ,则掏出全部检验管测其透光率。 6.8.2 用未接种空白试管(S1)作空白,将分光光度计透光率调到 100 (或吸光度为 0),读出接 种空白试管(S2)的读数。再以接种空白试管(S2)为空白,调理透光率为 100 (或吸光度为 0), 依次读出其他每支试管的透光率(或吸光度)。 GB 5413.142010 4 6.8.3 用涡旋混杂器(5.4)充分混杂每一支试管(也可以加一滴消泡剂)后,立刻将造就液移入比色 皿内举行测定,波长为 550 nm,待读数摇动 30 s 后,读出透光率,每支试管摇动时间要相同。以维生 素 B12规范品的含量为横坐标,透光率为纵坐标作规范曲线。 6.8.4 依据待测液的透光率,从规范曲线中查得该待测液中维生素 B12的浓度,再依据稀释因子跟称 样量算计出试样中维生素 B12的含量。透光率逾越跨过规范曲线管 S 3~S 10 规模的试样管要舍去。 6.8.5 对每个编号的待测液的试管, 用每支试管的透光率算计每毫升该编号待测液维生素 B12的浓度, 并算计该编号待测液的维生素 B12浓度平均值,每支试管测得的该浓度不得逾越跨过该平均值的±15 ,超 过者要舍去。假如契合该央求的管数少于全部的四个编号的待测液的总管数的 2/3,用于算计试样含量 的数据是不充分的, 需求从新检验。假如契合央求的管数逾越跨过本来管数的 2/3,从新算计每一编号的有 效试样管中每毫升测定液中维生素 B12含量的平均值,以此平均值算计全部编号试样管的总平均值为 Cx。用于算计试样中的维生素 B12含量。 注绘制规范曲线,既可读取透光率(T ) ,也可读取吸光度(A) 。 7 剖析结果的表述 试样中维生素 B12的含量按公式 1 算计 100 1000 f m C X x 1 式中 X试样中维生素 B12的含量,单元为微克每百克表现(μg/100 g) ; Cx6.8.5 中算计所得的总平均值,单元为纳克(ng) ; m 试样的质量,单元为克(g) ; f稀释倍数。 以重复性前提下掉掉的两次自力测定结果的算术平均值表现,结果保管两位有用数字。 8 精致度 在重复性前提下掉掉的两次自力测定结果的相对差值不得逾越跨过算术平均值的 10 。 9 其他 本规范检出限为 0.1 μg/100g。 GB 5413.142010 5 附录 A (模范性附录) 造就基跟试剂 A.1 乳酸杆菌琼脂造就基 A.1.1 要素 番茄汁 100 mL,三号卵白胨 7.5 g,酵母浸膏 7.5 g,葡萄糖 10.0 g,磷酸二氢钾 2.0 g,聚山梨糖单 油酸酯 1.0 g,琼脂 14.0 g,水 1000 mL,pH 6.8 ±0.1(25 ℃ ±5 ℃)。 A.1.2 制法 先将除琼脂以外的其他要素消融于蒸馏水中,调理 pH,再介入琼脂,加热煮沸至完好消融。混杂 平均后分装试管,每管 10 mL。121 ℃高压灭菌 15 min,备用。 A.2 乳酸杆菌肉汤造就基 A.2.1 要素 番茄汁 100 mL,三号卵白胨 7.5 g,酵母浸膏 7.5 g,葡萄糖 10.0 g,磷酸二氢钾 2.0 g,聚山梨糖单 油酸酯 1.0 g,水 1000 mL,pH 6.8 ± 0.1 (25 ℃ ± 5 ℃)。 A.2.2 制法 先将上述要素(A.2.1)消融于水中,调理 pH,加热煮沸,混杂平均后分装试管,每管 10 mL。121 ℃高压灭菌 15 min,备用。 A.3 维生素 B12 测定用造就基 A.3.1 要素 无维生素酸水解酪卵白 15.0 g,葡萄糖 40.0 g,天门冬酰胺 0.2 g,醋酸钠 20.0 g,抗环血酸 4.0 g, L-胱氨酸 0.4 g,DL-色氨酸 0.4 g,硫酸腺嘌呤 20.0 mg,盐酸鸟嘌呤 20.0 mg,尿嘧啶 20.0 mg,黄嘌呤 20.0 mg,核黄素 1.0 mg,盐酸硫胺素 1.0 mg,生物素 10.0 μg,烟酸 2.0 mg,p-氨基苯甲酸 2.0 mg,泛 酸钙 1.0 mg,盐酸吡哆醇 4.0 mg,盐酸吡哆醛 4.0 mg,盐酸吡哆胺 800.0 μg,叶酸 200.0 μg,磷酸二氢 钾 1.0 g,磷酸氢二钾 1.0 g,硫酸镁 0.4 g,氯化钠 20.0 mg,硫酸亚铁 20.0 mg,硫酸锰 20.0 mg,聚山 梨糖单油酸酯(吐温 80)2.0 g,水 1000 mL,pH 6.0 ± 0.1(25 ℃ ± 5 ℃)。 A.3.2 制法 将上述要素消融于水中,调理 pH,备用。
编号:20190623224814232    模范:共享资本    年夜小:227.44KB    格式:RAR    上传时间:2019-06-23
  
3
积分
关 键 词:
5413.14-2010 婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定 5413.14 婴幼儿食物跟乳品中维生素 B12 的测定 GB5413.14-2010 婴幼儿食物跟乳品中维生素 B12的
资本描写:
GB 5413.14-2010发布稿 婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定 发布稿.rar,5413.14-2010,婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定,5413.14,婴幼儿食物跟乳品中维生素,B12,的测定,GB5413.14-2010,婴幼儿食物跟乳品中维生素,B12的
  通宝tb888网全部资本均是用户自行上传分享,仅供网友进修交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
关于本文
本文标题:GB 5413.14-2010发布稿 婴幼儿食物跟乳品中维生素B12的测定 发布稿.rar
链接所在:/p-20189346.html
关于咱们 - 网站声明 - 网站地图 - 资本地图 - 友谊链接 - 网站客服 - 联络咱们

网站客服QQ:2846424093    通宝tb888上传用户QQ群:460291265   

[email protected] 2016-2018  beatahowe.com 网站版权全部   

备案号:苏ICP备12009002号-5